Journal of Basic Microbiology
Vol 34, 1994; 17-22
by Jochen Gartz
Pełny tekst artykułu:
Przez ostatnie 15 lat wiele razy publikowano materiały na
temat wykrywania i wyodrębniania psychotropowych pochodnych tryptaminy:
psylocybiny, psylocyny, baeocystyny z grzybów (Gartz 1992, 1993).
Różne metody ekstrakcji alkaloidów z grzybów opierały się głównie na
użyciu metanolu jako rozpuszczalnika (Beug i Bigwood 1982, Gartz 1987,
Sottolano i Lurie 1983).
W 1985 roku opisano wodno-organiczną metodę
ekstrakcji za pomocą kwasu octowego (Casale 1985). Ostatnio, czescy
analitycy do ekstrakcji pochodnych indolu z grzyba Psilocybe bohemica
Sebek użyli wodnych roztworów metanolu i etanolu (czystych lub z
dodatkiem azotanu potasu) (Kysilka i Wurst 1990, Wurst et al 1992).
Twierdzono, że możliwe jest uzyskanie większej ilości psylocyny używając do
ekstrakcji wodnego roztworu etanolu zamiast bezwodnego metanolu oraz że
możliwe jest użycie obu metod razem. W tej
pracy opierano się na metodach ekstrakcji psylocybiny, psylocyny i
baeocystyny z różnych gatunków grzybów włącznie z P. bohemica Sebek przy
użyciu metanolu i innych mieszanin rozpuszczalników (Casale 1985, Kysilka i
Wurst 1990, Wurst et al. 1992).
Materiały i metody:
Grzyby: Hodowane sztucznie: Psilocybe semilanceata (FR.) Kumm
hodowane na końskim oborniku (Gartz 1991); Psilocybe cubensis (Earle) Singer
hodowane na mieszaninie krowiego gnoju i ryżu (Gartz 1989a); P.
bohemica hodowany na ryżu/wodzie (Gartz i Mueller 1989; Gymnopilus
purpuratus (Cooke i Mass) Singer hodowane na ryżu/trocinach (Gartz i Mueller 1990, Gartz
1991).
Grzyby rosnące naturalnie: Panaeolus cyanescens (BK & BK) SACC. (Oahu, Hawaje 13.11.88); Inocybe aeruginascens Babos
(Poczdam 20.05.1987); P. bohemica Sebek (przy Sazava, Czechy 15.11.89).
Wszystkie basidiocarps zostały wysuszone w temp. pokojowej.
Pozostałości wody usunięto zamrażając (freeze-drying). Pojedyńcze okazy z
każdego gatunku pozostawiono w herbarium Uniwersytetu w Liepzig (LZ).
Metoda ekstrakcji: Próbki (0.01-0.1 g) suchych i
zmielonych grzybów ekstraktowano 5 do 20 ml metanolu przez 0.5 do 12 godzin
używając mieszadełka magnetycznego w temperaturze pokojowej. W takich samych
warunkach ekstraktowano przy użyciu wodnego roztworu kwasu octowego (Casale
1985) oraz wodnego roztworu etanolu (psylocyna) i metanolu (psylocybina)
(Kysilka i Wurst 1990, Wurst et al. 1992), których użyto na tych samych
porcjach grzybów. Przy użyciu roztworów alkoholi zmieniono czas ekstrakcji
na 10 minut dla psylocybiny i 160 minut dla psylocyny (Kysilka i Wurst
1990). Używając rozcieńczonego kwasu octowego, próbkę po ekstrakcji umieszczano w łaźni
wodnej na 10 minut po czym analizowano, a następnie była analizowana 10 minut
po ekstrakcji i analizie, po czym analizowano ją jeszcze raz (Casale 1985).
Rozdzielanie i analizę pochodnych indolu za pomocą HPLC i TLC opisano
gdzie indziej (Gartz 1987, Semerdzieva et al. 1986, Wurst et al. 1992).
Analizę na obecność enzymów fosfatazy (? phosphatase) w ekstraktach
również opisano w innej pracy (Weber i Horita 1963).
Wyniki:
W doświadczeniu tym ekstrakcja czystym metanolem
psylocyny, psylocybiny i
baeocystyny nie była ukończona po 30 minutach dla wszystkich gatunków, a
nawet po sześciu godzinach przy analizie P. cubensis i G purpuratus. Całkowite
wyodrębnienie alkaloidów z masy grzybów obserwowano po 12 godzinach. Po tym
czasie nie otrzymano żadnych pochodnych indolu ekstraktując próbkę wodnym
roztworem metanolu/etanolu czy kwasu octowego lub też używając chloroformu przy
psylocynie.
Baeocystynę czyli niekompletnie zmetylowany odpowiednik i prawdopodobny
prekursor psylocybiny (Gartz 1989a) wykryto we wszystkich badanych grzybach
ekstraktując je metanolem, ale w niektórych przypadkach wykryto ją w bardzo
małych ilościach (Tabela 1).
Psylocybina i psylocyna występowała w takich samych
ilościach, w jakich wykrywano ją wcześniej (Gartz 1992, 1993). Ta substancja
jest estrem kwasu fosforowego jak psylocybina i baeocystyna. Podobne ilości
psylocyny wykryto w ekstraktach z P. cubensis i G. purpuratus przy użyciu
wodnego roztworu kwasu octowego kontra metanol (Tabela 2). Zawartość psylocybiny i psylocyny była ta sama pod względem ilości
jak ta odkryta wcześniej (Gartz 1992, 1993). Substancja ta wygląda na ester kwasu
fosforowego, tak jak psylocybina i baeocystyna.
Podobne stężenie psylocyny wykryto w ekstraktach P. cubensis i G. Purpuratus
przy użyciu wodnego roztworu kwasu octowego zamiast czystego metanolu
(tabela 2).
Tabela 1
Zawartość alkaloidów indolowych w grzybach różnych gatunków w
ekstraktach przy użyciu czystego metanolu jako rozpuszczalnika (%, sucha masa).
Gatunek
Psylocybina
Psylocyna
Baeocystyna
P. semilanceata
0.98
-
0.34
P. bohemica
0.85
0.02
0.04
P. bohemica (hodowany sztucznie)
0.93
0.04
0.02
P. cubensis
0.63
0.11
0.02
G. purpuratus
0.34
0.29
0.05
I. aeruginacens
0.40
-
0.21
P. cyanescens
0.32
0.51
0.02
Tabela 2
Zawartość alkaloidów przy użyciu kwasu octowego do ekstrakcji suchych
grzybów (%, sucha masa).
Gatunek
Psylocybina
Psylocyna
Baeocystyna
P. semilanceata
0.97
0.15
0.11
P. bohemica
0.60
0.21
-
P. bohemica (hodowany sztucznie)
0.65
0.28
-
P. cubensis
0.45
0.25
-
G. purpuratus
0.24
0.35
0.01
I. aeruginacens
0.32
0.05
0.15
P. cyanescens
0.20
0.61
-
Tabela 3
Wyniki ekstrakcji grzybów sześciu gatunków przy użyciu wodnych mieszanin
metanolu i etanolu (%, sucha masa).
Gatunek
Psylocybina
Psylocyna
Baeocystyna
P. semilanceata
0.80
0.15
0.11
P. bohemica
0.60
0.21
-
P. bohemica (hodowany sztucznie)
0.65
0.28
-
P. cubensis
0.45
0.25
-
G. purpuratus
0.24
0.35
0.01
I. aeruginacens
0.32
0.05
0.15
P. cyanescens
0.20
0.61
-
Używając do ekstrakcji mieszaniny etanolu z metanolem udało się uzyskać
więcej psylocyny z każdych badanych grzybów, jednak zawsze wyodrębniano
mniej psylocybiny niż kiedy stosowano czysty metanol (Tabela 3).
Dodatkowo, można było wykryć dużą aktywność enzymów fosfatazy
w wodnych roztworach wszystkich gatunków grzybów. Kiedy użyto kwasu octowego
jako rozpuszczalnika, tylko ekstrakt z P. cubensis i P. cyanescens pokazywał znaczącą aktywność
enzymów. Przez to psylocybina kompletnie przekształcała się (za pomocą
enzymów, dephosphorylated) do psylocyny kiedy ogrzewano próbkę z
ekstraktem z kwasu octowego, pozatym nie wykryto baeocystyny w P.
cyanescens.
Komentarz
Wiadomo, że ekstrakcja na metanolu potrzebuje czasu ponad
12 godzin w temperaturze pokojowej (Beug i Bigwood 1982, Gartz 1987,
Semerdzieva et al. 1986) lub jedną godzinę przy 45°C (SCOTTOLANO i
Lurie 1983) by ekstrakcja przebiegła całkowicie (czyli by zostały
wyodrębnione wszystkie alkaloidy).
W naszych badaniach psylocyna wykazywała duże stężenie przy
prostej ekstrakcji metanolem różnych gatunków (Gartz 1987, 1989c, 1991).
Przeprowadzając ilościową analizę na pochodne indolu po biotransformacji
tryptaminy i podobnych związków w owocnikującej grzybni P.
cubensis wykryto dużą zawartość psylocyny w każdym grzybie, dla przykładu w
tych ekstraktowanych metanolem (Gartz 1989a, b). Czescy analitycy, używając wodnego r-ru
metanolu i etanolu jako rozpuszczalnika do analizy P. bohemica, nie zawsze analizowali tą samą partię grzybów
(Kysilka, osobisty kontakt (pers. communication) 1989).
Znaleźliśmy różnice między pojedynczymi grzybami każdego
gatunku, także na P. bohemica pobieranych z tego samego terenu (Gartz i
Mueller 1989), jak również z kontrolowanych (uprawianych?) kultur (Gartz
1991). Dodatkowo, dużą aktywność enzymów fosfatazy w wodno-alkoholowych roztworach
ekstraktów z P. cubensis i innych zawierających psylocybinę grzybów wykryto i opisano
wiele lat temu (BOCKS 1968, Gartz 1993, Weber i Horita 1963). Enzymy te
wyodrębniono rozpuszczalnikiem zawierającym wodę i powodowały one częściową
defosforylację psylocybiny do psylocyny (Tabela 1 i 3). Używając tych
roztworów obserwowano w niektórych przypadkach sinienie mieszaniny po
ekstrakcji, a był to sygnał częściowego utlenienia psylocyny (BOCKS 1968,
Gartz 1989a, Weber i Horita 1963). Interesującym jest, że większość
baeocystyny rozkładała się podczas ekstrakcji wodą zawierającą alkohol
(Tabela 1 i 3).
Casale (1985) opisał szybkie tworzenie psylocyny po
całkowitej defosforylacji psylocybiny przy ogrzewaniu ekstraktu na
rozcieńczonym kwasie octowym. Jest teraz jasne, że przemiana ta jest
powodowana udziałem enzymów i nie jest powodowana samym kwasem. Dla
przykładu estry kwasu fosforowego i psylocybiny, baeocystyny i aeruginascyny
(aeruginascin) w tychże kwasowych ekstraktach z I. aeruginacens były
stabilne przy ogrzewaniu w przeciwieństwie do tych samych alkaloidów w
roztworach P. cubensis i P. cyanescens. Wygląda na to, że aktywne enzymy
fosfatazy można wyodrębnić wodnym roztworem kwasu octowego tylko z tych
dwóch odmian - w przeciwieństwie do ekstrakcji z użyciem wodnych roztworów
alkoholi. Poza tym próby rozdzielenia psylocybiny i psylocyny prostymi
metodami używając mieszaniny organicznych rozpuszczalników i wody były
niezadawalające (THOMSON 1980).
Badania te pokazują, że wysokie stężenie psylocyny w P.
bohemica (Kysilka i Wurst 1990, Wurst et al. 1992) i brak jej wykrycia wcześniej
(Gartz i Mueller 1989) były sztucznym zjawiskiem spowodowanym enzymatyczną
przemianą psylocybiny przy użyciu wodnych roztworów organicznych
rozpuszczalników. Ekstrakcja z czystym metanolem jest najbezpieczniejszą
metodą przy wyodrębnianiu związków z rodziny indoli z grzybów różnych
gatunków.
Podziękowania
Autor dziękuje następującym osobom: G. Drewitz, J. Allen, G.K. Mueller
oraz M. Semerdzieva który geneously supplied herbarium material and/or valuable
information.
Bibliografia
Beug MW, Bigwood J. 1982. Psilocybin and psilocin levels in
twenty species from several genera of wild mushrooms in the Pacific
Northwest, U.S.A. J. Ethnopharm, 5, 271-289.
Bocks SM. 1968. The metabolism and psilocin and psilocybin
by fungal enzymes. Biochem. J., 106, 12-13.
Casale JF. 1985. An aqueous-organic extraction method for
the isolation and identification of psilocin from hallucinogenic mushrooms. J. Forensic Sci., 30, 247-250.
Gartz J. 1985. Zur Isolierung des Baeocystins aus den
Fruchtkoerpern einer Psilocybe-Art. Pharmazie, 40, 274.
Gartz J. 1987. Variation deer Indolalkaloide von Psilocybe
cubensis durch unterschiedliche Kultivierungsbedingungen. Beitraege z. Kenntnis d. Pilze
Mitteleuropas, 3, 275-281.
Gartz J. 1989a. Biotransformation of tryptamine derivatives
in mycelial cultures of Psilocybe. J. Basic Microbiol., 29, 347-352.
Gartz J. 1989b. Biotransformation of tryptamine in fruiting
mycelia of psilocybe cubensis. Planta Med., 55, 249-250.
Gartz J. 1989c. Occurence of psilocybin, psilocin and
baeocystin in Gymnopilus purpuratus. Persoonia, 14, 19-22.
Gartz J, Mueller GK. 1990. Analysis and cultivation of fruit
bodies and mycelia of Psilocybe bohemica. Biochem. Physiol. Pflanzen, 184,
337-341.
Gartz J, Mueller GK. 1990. Versuche zur Kultur von
Gymnopilus purpuratus, Purpurflaemmling. Myk. Mitt. blatt (Halle), 33,
29-30.
Gartz J. 1991. Further investigations on psychoactive
mushrooms of the genera Psilocybe, Gymnopilus and Conocybe. Ann. Mus. civ.
Rovereto (Italy), Sez. sc. nat.,7, 265-274.
Gartz J. 1992. New aspects of the occurance chemistry and
cultivaion of European hallucinogenic mushrroms. Ann. Mus. civ. Rovereto
(Italy), Sez. sc. nat., 8, 107-124.
Gartz J. 1993. Narrenschwaemme. Psychotrope Pilze in Europa
in Europa. Herausforderung an Forschung und Wertsystem. Editions Heuwinkel. Genf/Neuallschwill.
Kysilka R, Wurst M. 1990. A novel extraction procedure for
psilocybin and psilocin determination in mushroom samples. Planta Med., 56,
327-328.
Semerdzieva M, Wurst M, Koza T, Gartz J. 1986. Psilocybin in
Fruchtkoerpern von Inocybe aeruginascens. Planta Med., 47, 83-85.
Sottolano SM, Lurie IS. 1983. The quantitation of psilocybin
in hallucinogenic mushrooms using high performance liquid chromatography. J.
Forensic Sci., 28, 931-935.
Thomson BM. 1980. Analysis of psilocybin and psilocin in
mushroom extracts by reversed-phase high performance liquid chromatography. J. Forensic Sci., 25, 779-785.
Weber LJ, Horita A. 1963. Oxydation of 4 and
5-hydroxy-indole derivatives by mammalian cytochrome oxydase. Life Sciences
1, 44-49.
Wurst M, Kysilka R, Koza T. 1992. Analysis and islolation of
indole alkaloids of fungi by high-performance liquid chromatography. J.
Chromatogr., 593, 201-208.
Tekst oryginalny w języku angielskim z erowid.org.
What is symbol of unity
of a woman and a man
({:-:})' it is a mirror
free of love and underst{ae}nding
be love of love
to be under tight control of ***
Ann Schulgin you have to
be me. Miranda McKennitt-Schulgin-Vega.
{}{NaSa}.A.{2c-i}.A.{US}.A.
{:****:} { identity symbol } {space remembers} {~~KNOTT}{ }
Witam. Zaznaczam, jak zwykle, iż niniejszy tekst jest jedynie fikcją literacką.
Obawiam się, że w tym raporcie może dojść (a raczej na pewno dojdzie) do takiej sytuacji, gdzie jako jeden trip opiszę dwa... Po pewnym czasie zlewają się one, gdyż zarówno miejscówka, jak i towarzystwo były takie same, a i pogoda podobna... Przyjmijmy jednak, że wszystko działo się jednego dnia... Odświeżyłem nieco wspomnienia z bratem, więc opowiadanie powinno być nieco bardziej szczegółowe.
weekend, siedzę sam w domu, perspektywa grania na kompie/siedzenia na necie/oglądania filmów. Ogólny nastrój - dobry. Komfort psychiczny związany z bezpieczeństwem w domu i pewnością bycia samemu.
Siedzę sobie wieczorkiem, gram w Call of Duty, popijam drinkami, żeby sobie umilić czas. Niestety z mj strasznie lipnie było na osiedlu, nie udało mi się niczego pochytać więc - wódka stary przyjaciel. Ok. godz 21, już lekko sfazowany alkoholem, miałem niesamowitą chcicę na palenie. Brak możliwości, ale non stop wracałem do tego myślami. Wtedy też mnie olśniło, że jeden kumpel ma przecież grzyby, podobno te lepsze, czyli cubensisy, a nie nasze polskie łysiczki. Kumpel mnie uprzedzał, że już po połowie tego co kupiłem jest niesamowita bania grzybowa.
Byłem ciekawy tego, jak to będzie. Spokojna i cicha noc. Nie brałem opiatów przez dwa ponad miesiące, więc tolerancja spadła, chciałem się zabawić, choć trochę.
23:50 - Znalazłem pudełko z nazwą leku, której nigdy wcześniej nie widziałem, nie słyszałem. Szukałem czegoś na ból głowy, dokuczał mi on przez ostatnie dwa dni, tym razem było tak samo. Znalazłem coś, przewróciłem opakowanie na drugą stronę, czytam, widzę napis „tramadol” coś tam. O tym słyszałem. Przejrzałem pół internetu, dowiadując się czy to to, o czym myślę. Cóż, czemu nie, zabawimy się. Nie brałem żadnych opiatów od trzech miesięcy więc czemu nie. Podobno wolno należy brać, więc wziąłem jedną tabletkę. (75mg)
Dobre nastawienie moje i F, mroczny klimat starej polskiej wsi, wielkiego lasu i nie przebranych pól, a wszystko pod księżycem w pełni i pięknym sierpniowym niebem
. Cześć, opisze tu mój trip raport po tej pochodnej kwasu, bo sądzę że był całkiem ciekawy i mocno zapadł mi w pamięci . Dawka to tylko jeden karton 100ug ale s&s-miażdżące. Byłem z moim przyjacielem F na totalnym zadupiu , tylko wielki las, jeziorko i kilometr dalej mała wioska( Tak pólnocno wschodnia Polska ) . Rozbiliśmy z F i kilkoma znajomymi biwak w lesie nad jeziorem. Jak to już było wcześniej zaplanowanie, ja i F chcieliśmy wziąć te 2 kartony 1p lsd, które mi zostały sprzed wakacji.
Komentarze